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ELISA實驗主要的五種方法實驗原理

來源: 上海西格生物科技有限公司 >> 進入該公司展臺 2022/10/17 16:15:37 已瀏覽:
導讀:ELISA實驗主要的五種方法實驗原理

酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme ed immunosorbent assay,簡寫ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體特異性結合進行免疫反應的定性和定量檢測方法。主要有 5 種方法:雙抗夾心法、競爭法、直接法、間接法、捕獲法實驗原理。


1、雙抗夾心法:適用于大分子物質(zhì)的檢測。將已知的可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體表面,利用抗原抗體特異性結合進行免疫反應的定性和定量檢測方法,具有快速、靈敏、簡便等優(yōu)點。


2、競爭法:競爭法適用于較少表位的小分子物質(zhì)。將抗體包被于微孔板中,加入無關蛋白載體封閉未結合位點,加入標準品和生物素標記的抗原物質(zhì)進行競爭結合。


3、直接法:主要用于抗原的檢測,將抗原直接固定在固相載體上,洗滌后加入酶標特異性抗體,洗滌后加入底物顯色,該方法對抗體的特異性要求較高。


4、間接法:主要用于抗體的檢測。將特異性抗原包被在固相載體表面,與標本中相應特異性抗體結合,洗滌后加入酶標的抗體,洗滌后加入底物顯色。該方法對抗原的特異性要求較高。


5、捕獲法:捕獲法主要用于血清中某種抗體亞型的檢測。先將針對 IgM的第二抗體連接與固相載體,用以結合樣品中的所有 IgM,洗滌除去 IgG等無關的物質(zhì),然后加入特異性抗原與待檢 IgM結合,再加入抗原特異的酶標抗體,*形成固相二抗-IgM-抗原-酶標抗體復合物,加酶底物顯色即可對樣品中待檢 IgM是否存在及其含量進行測定。

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