細(xì)胞凍存的基本原理： 慢凍

手動降溫：將細(xì)胞依序放在4℃（30分鐘）、-20℃（1小時）、-80℃（*）后移至液氮中保存。

程序降溫盒：是一般*廣泛使用的降溫法，為一種特制冷凍容器（填充異丙醇或依靠特制金屬導(dǎo)熱），使細(xì)胞以每分鐘約-1℃的速度降至-80℃（*），然后移至液氮中保存。

大家可以根據(jù)自身情況或者實驗條件選擇不同的凍存方式。

細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用。

細(xì)胞代謝過程需要各種蛋白酶的參與，而這些蛋白酶在環(huán)境溫度低于-70℃時會集體罷工，低溫貯藏的目的是通過低溫使代謝活動近乎停止。細(xì)胞因此進入休眠狀態(tài)，使細(xì)胞“不會老”，可以長期保存。

因為凍融過程對所有細(xì)胞和組織都是有一定傷害的，因此，需要開發(fā)出有效的技術(shù)來防止細(xì)胞死亡和損傷。

這時，低溫保護劑就發(fā)揮出它的作用了。

低溫保護劑可保護細(xì)胞不受細(xì)胞內(nèi)冰凍影響，目前多采用DMSO、甘油、*和丙二醇等滲透型低溫保護劑。它們的作用機制包括：自由進入細(xì)胞，取代水，使冰點下降，充當(dāng)鹽的二次溶劑，提高細(xì)胞膜對水的通透性。

但是，部分低溫保護劑在緩慢冷凍過程中雖然會保護細(xì)胞，但它們也會引起細(xì)胞毒性，尤其是在室溫下。因此，在標(biāo)準(zhǔn)的自制凍存液中，會含有血清，血清是用來降低細(xì)胞毒性的，但血清也不是*的。